肠道类器官作为一种高度模拟真实肠道结构和功能的体外模型，已成为研究肠道生理、病理及其疾病机制的重要工具。培养小鼠肠道类器官的过程需要精确控制培养条件和细胞因子的添加，其中不同阶段所需细胞因子各不相同。

初始培养阶段

在初始培养阶段（干细胞增殖），使用的培养基包括基础培养基（如DMEM/F-12）。所需的生长因子有：

• Wnt-3a：激活Wnt信号通路，维持干细胞的自我更新。
• R-spondin-1：增强Wnt信号，促进干细胞增殖。
• EGF（表皮生长因子）：促进细胞增殖。

同时，还需添加抑制因子：

• Noggin：抑制BMP信号，维持干细胞的未分化状态。

分化诱导阶段

在分化诱导阶段，继续使用DMEM/F-12等基础培养基。此时需要添加以下因子：

• ActivinA 和 FGF2：在分化初期加入，促进内胚层的形成。
• IL-22：在分化中期加入，促进潘氏细胞的分化。
• CHIR99021（GSK3β抑制剂）：用于调控Wnt信号通路，促进细胞分化。

在此过程中，可能需要去除或减少某些增殖因子的浓度，如适当降低EGF，以避免对细胞增殖的过度刺激。

维持与长期培养阶段

类器官分化完成后，进入维持与长期培养阶段，此时的培养基调整主要针对类器官的稳定性和功能。继续使用适合的基础培养基，并根据需要维持因子，如适当调整Wnt-3a和Noggin的浓度。同时，应逐渐减少或去除ActivinA、FGF2等分化诱导因子。

注意事项

在培养过程中需注意以下几点：

• 培养基更换频率：通常每2-3天更换一次，以保证营养成分的充足和代谢废物的清除。
• 监测类器官状态：定期观察类器官的形态和生长状态，及时调整培养条件。
• 无菌操作：整个培养过程需严格遵循无菌规范，避免污染。

通过上述阶段性的培养基调整，可以有效诱导小鼠肠道类器官的成功分化，并维持其长期稳定培养。人生就是博-尊龙凯时不仅提供小鼠肠道类器官培养所需的基础培养基和细胞因子，还提供现成的小鼠肠道类器官培养基套装3DCultrIntestinalOrganoidGrowthMedium(Mouse)，使用便捷且操作简单，更好助力您的科研之路。