人生就是博-尊龙凯时为您提供细胞培养的详细说明，确保您在实验室中的工作顺利进行，以下是关于细胞培养的具体条件及步骤。

一、细胞培养条件

细胞名称：生长特性及其他基本信息

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：基础培养基采用1:1的MCDB105培养基（最终浓度为15g/L碳酸氢钠）和M199培养基（最终浓度为22g/L碳酸氢钠）混合而成，加入15%的优质胎牛血清及1%的双抗。初次传代时建议使用1:2的比例进行传代，每2天更换培养基。

备注：用无菌离心管收集培养基以供过渡对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接采购我们的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，建议在细胞培育良好状态下，填充完全培养液并封闭瓶口，以确保细胞运输的最佳状态。收到细胞时，请使用75%的酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。随后，将细胞瓶置于37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。在显微镜下观察细胞生长，并进行多倍数拍照保存（建议提供40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，如不提供照片则默认细胞状态良好。

在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自行配制的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管，并保留5ml完全培养基，以放入37℃、5%CO2的孵箱中进行培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS对细胞进行润洗1-2次。
2. 在培养瓶中加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃的培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞已脱落，则迅速在操作台轻敲瓶子，并加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后，吸出悬液并转移至离心管中，1000RPM下离心5分钟，弃上清液后补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2培养箱中培养。

b、细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS洗涤细胞一次；
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞收缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，然后轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中并在1000rpm离心5分钟；
3. 弃上清后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中；
4. 将冻存细胞直接存放于-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃中保存超过24小时。细胞复苏时，从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶，将细胞移至含5ml完全培养基的离心管，在1000rpm下离心5分钟，弃上清后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5%CO2培养箱中，第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落，属正常现象。如脱落细胞数量较多，可将瓶内的培养液收集至离心管中以进行过渡培养，并使用胰酶处理。

五、售后条款

1）可重发的情况：

1. 如果细胞在运输途中遭遇丢失、瓶身破损或严重漏液等问题，将进行重发；
2. 收到细胞后48小时内如出现污染问题，需提供真实的实验结果，核实后重发；
3. 常温发货细胞静置24小时或干冰运输细胞复苏后24小时内如未存活（需提供状态照片），将重发；
4. 对于未开封且常温发货细胞静置4小时后出现污染的情况，将重发；
5. 如在收到产品7天内有活性问题，需提供有效实验结果以判定活力，核实后重发；
6. 在收到细胞的当天及第2、3天内拍照记录，若3天内未告知情况，将视为合格。

2）不予以重发的情况：

1. 因客户自身原因造成的细胞污染，不予重发；
2. 因客户不正确操作导致的细胞状态不佳，不予重发；
3. 使用非推荐培养体系导致细胞状态不佳，亦不予重发；
4. 若细胞状态不佳且未提供细胞培养前3天照片，将不予重发；
5. 在培养过程中进行其他处理而造成的细胞问题，不予重发；
6. 如在收到后2天内未告知问题，将不予重发；
7. 其他情况将视具体情况而定。

选择人生就是博-尊龙凯时，为您的生物医学研究保驾护航。我们的细胞培养方案旨在为您提供最佳的支持和服务。若有任何疑问，欢迎随时联系我们！