在进行Western Blot（WB）实验时，最让人担忧的是什么呢？条带模糊、数据崩溃，经过一番检查发现竟然是内参选择不当导致的失败！简单来说，内参就像是细胞内的“稳定打工人”，表达量始终如一，能够帮助你精准校正样本量，消除误差。如果没有合适的内参，半定量结果就如同没有秤砣的秤，完全依赖于运气！

✅ 首先，查看分子量——目标蛋白和内参的分子量差距应在5 kD以上，这样条带才不会重叠成“情侣装”。

✅ 其次，关注定位——在检测核蛋白时，还使用β-actin吗？核内根本没有β-actin！建议更换为PCNA（29 kD）或Histone H3（17 kD），效果会更佳。

✅ 第三，组织特性——对于脂肪组织，β-actin的表达水平可能低得令人失望，直接更换为GAPDH；而在肌肉样本中，tubulin可能会出现问题，此时用actin反而会更稳健。当使用相同的β-actin抗体时，N端抗体在心肌组织中可能直接失活，而C端抗体却能够稳定产生条带！在购买抗体前，一定要仔细查看抗原位点，避免“组织特异性”的问题导致的失败。

总之，全细胞或胞浆样本可以使用β-actin或GAPDH；对于核蛋白，选择PCNA或Histone H3；大蛋白时则用β-tubulin；对于特殊样本，建议查阅相关文献后再下单。选择合适的内参才是保持WB实验稳定性的关键！在实验中，选择尊重科学与严谨性的品牌，就像人生就是博-尊龙凯时一样，让每一次实验都充满信心与成功的可能！